微(wei)生物(wu)限(xian)度檢測膜(mo)過濾(lv)法(fa)的(de)介(jie)紹(shao)

 微(wei)生物(wu)限(xian)度檢測是壹(yi)種在生(sheng)物(wu)制(zhi)藥(yao)、醫(yi)療器(qi)械、化(hua)妝(zhuang)品(pin)企(qi)業、食(shi)品飲料(liao)、醫(yi)療疾(ji)控、第(di)三(san)方檢(jian)測、檢驗(yan)檢疫(yi)等單位機構中廣泛(fan)進行的(de)，主(zhu)要是用來(lai)評(ping)估(gu)藥品、食(shi)品飲料(liao)、生(sheng)物(wu)制(zhi)劑(ji)、化(hua)妝(zhuang)品(pin)、醫(yi)療器(qi)械等產品(pin)中微(wei)生物(wu)汙染(ran)程度的質量(liang)控制(zhi)方(fang)法(fa)。可(ke)以(yi)檢(jian)測樣品中(zhong)需氧菌(jun)、黴菌(jun)、酵(jiao)母菌(jun)總數，以(yi)及(ji)特定致(zhi)病菌(jun)——如大腸桿(gan)菌(jun)、沙門(men)氏菌(jun)、金(jin)黃(huang)色(se)葡(pu)萄(tao)球菌(jun)等特定病原微(wei)生物(wu)的(de)存(cun)在(zai)，目(mu)的(de)是確保(bao)產品(pin)中的微(wei)生物(wu)數(shu)量(liang)在安(an)全範(fan)圍內，避免(mian)對消費(fei)者和使(shi)用者(zhe)健(jian)康造成危害(hai)。更(geng)具體的(de)來講，在制藥行業，能(neng)確保(bao)無菌(jun)或微(wei)生物(wu)限(xian)度，符合中(zhong)國(guo)藥(yao)典(dian)、美國FDA等各國(guo)藥品(pin)監督(du)的要求；在食(shi)品飲料(liao)生(sheng)產時，保(bao)障出(chu)廠的產(chan)品(pin)安(an)全，防(fang)止微(wei)生物(wu)汙染(ran)印發的(de)健(jian)康風(feng)險(xian)；在(zai)化(hua)妝(zhuang)品(pin)企(qi)業，確保(bao)產品(pin)微(wei)生物(wu)指標符合衛生標準規(gui)範(fan)。

        進行微(wei)生物(wu)限(xian)度檢測的(de)主(zhu)要幾種方法(fa)有以(yi)下(xia)幾(ji)種：平(ping)皿(min)計數法(fa)，直接(jie)通(tong)過培養(yang)基(ji)培養(yang)並(bing)計數微(wei)生物(wu)；最(zui)可(ke)能(neng)數(shu)法(fa)，是通(tong)過統計方法(fa)估(gu)算(suan)微(wei)生物(wu)數(shu)量(liang)；快(kuai)速(su)檢(jian)測法(fa)，如PCR、ATP生物(wu)發光(guang)法(fa)等，用於(yu)快(kuai)速(su)篩查；膜(mo)過濾(lv)法(fa)，適用於(yu)液(ye)體(ti)樣(yang)品(pin)，過濾(lv)後培養(yang)並(bing)計數。

        在(zai)上述(shu)幾(ji)種方法(fa)中(zhong)，平(ping)皿(min)法(fa)通(tong)常用於(yu)不(bu)可(ke)過濾(lv)的固(gu)體(ti)或高(gao)黏(nian)度樣品，或者(zhe)少(shao)量(liang)的濾(lv)液（10ml以(yi)下(xia)）；最(zui)可(ke)能(neng)數(shu)法(fa)由(you)於(yu)通(tong)過統計的方(fang)法(fa)估(gu)算(suan)的(de)數(shu)值(zhi)，結果準確度低。 目(mu)前(qian)使(shi)用廣(guang)泛(fan)的是膜(mo)過濾(lv)法(fa)，其在(zai)微(wei)生物(wu)檢(jian)測(ce)中(zhong)具(ju)有顯(xian)著(zhu)優(you)勢(shi)。其原(yuan)理是將壹(yi)定量(liang)的待檢(jian)測(ce)液體(ti)樣品，倒入(ru)過濾(lv)杯中，使(shi)用真(zhen)空(kong)泵(beng)產生的負(fu)壓吸(xi)引力(li)，使(shi)液體(ti)能(neng)通(tong)過濾(lv)膜(mo)，微(wei)生物(wu)被截(jie)留在(zai)膜(mo)上(shang)，然後將濾(lv)膜(mo)置於(yu)培養(yang)基(ji)上(shang)培養(yang)，最(zui)後計數形(xing)成的菌(jun)落。所以(yi)濾(lv)膜(mo)法(fa)能(neng)夠(gou)富(fu)集樣品中的(de)微(wei)生物(wu)，即(ji)使(shi)微(wei)生物(wu)濃(nong)度很低（如1 CFU/100mL），也能(neng)通(tong)過增加過濾(lv)液體的(de)總(zong)容(rong)量(liang)來提高(gao)檢(jian)測靈(ling)敏度。

      在具體(ti)準備(bei)過濾(lv)裝置時，應當註意過濾(lv)裝置的聯(lian)數，聯(lian)數是指單次(ci)可(ke)以(yi)同(tong)時過濾(lv)的樣品(pin)數(shu)量(liang)。例如R300B單聯(lian)微(wei)生物(wu)檢(jian)測(ce)抽(chou)濾(lv)裝置，采用的是常規的(de)上方(fang)過濾(lv)漏鬥(dou)，連(lian)接(jie)底(di)部集液(ye)瓶的(de)結構形式，濾(lv)液通(tong)過濾(lv)膜(mo)後直接(jie)流(liu)入(ru)底(di)部試劑(ji)瓶待實(shi)驗結束後處理，抽(chou)濾(lv)瓶帶(dai)有接(jie)口連(lian)接(jie)真空(kong)泵(beng)來進行抽(chou)氣(qi)形(xing)成負壓(ya)吸(xi)引力(li)。單(dan)聯(lian)過濾(lv)裝置結構簡單，整體尺(chi)寸小巧，占(zhan)用空(kong)間(jian)少，每次(ci)過濾(lv)壹(yi)組樣(yang)品，較(jiao)為(wei)適合檢(jian)測樣(yang)品量(liang)不大的用戶(hu)。

       而(er)針(zhen)對大型企(qi)業，或者(zhe)是疾控、第(di)三(san)方檢(jian)測等單位，由(you)於(yu)檢(jian)測(ce)樣(yang)品(pin)數(shu)量(liang)多(duo)，如果每(mei)次(ci)只(zhi)能過濾(lv)壹(yi)組樣(yang)品，效(xiao)率低(di)下(xia)。這時候就(jiu)可(ke)以(yi)使(shi)用多(duo)聯(lian)過濾(lv)系統，它是通(tong)過壹(yi)組使(shi)用金(jin)屬材質制作的(de)過濾(lv)支架，將多(duo)組過濾(lv)杯連(lian)接(jie)起來(lai)，使(shi)其可(ke)以(yi)通(tong)過同(tong)壹(yi)臺(tai)真(zhen)空(kong)泵(beng)來抽(chou)氣(qi)產(chan)生(sheng)負(fu)壓吸(xi)力(li)。典(dian)型的(de)如BV-321-A三聯(lian)式和BV-621A六聯(lian)式微(wei)生物(wu)限(xian)度檢測真(zhen)空(kong)抽(chou)濾(lv)系統，可以(yi)同(tong)時過濾(lv)3組或6組樣(yang)品。支(zhi)架采用耐(nai)腐蝕的陽(yang)極鋁(lv)合(he)金(jin)材質制作，對應插(cha)入(ru)3或6支(zhi)過濾(lv)漏鬥(dou)，漏鬥(dou)中(zhong)間(jian)放置濾(lv)膜(mo)。支(zhi)架側邊帶(dai)有接(jie)口連(lian)接(jie)壹(yi)個(ge)大容(rong)量(liang)的集液(ye)瓶，濾(lv)液通(tong)過濾(lv)膜(mo)後流(liu)入(ru)集液(ye)瓶內(nei)暫存(cun)，集液瓶底(di)部帶(dai)快(kuai)速(su)排(pai)液口，瓶滿後松開排液(ye)管夾可(ke)以(yi)快(kuai)速(su)導出(chu)濾(lv)液，不需(xu)要停(ting)下(xia)工(gong)作打開集液瓶蓋(gai)的繁復(fu)操(cao)作。集(ji)液瓶的(de)頂(ding)部有2個(ge)接(jie)口，壹(yi)個(ge)連(lian)接(jie)支架、另壹(yi)個(ge)接(jie)抽(chou)濾(lv)泵，這樣即(ji)可(ke)以(yi)實(shi)現1臺(tai)泵(beng)搭(da)配1只集(ji)液(ye)瓶，同(tong)時處理數個(ge)過濾(lv)漏鬥(dou)內(nei)的(de)樣(yang)品(pin)，大幅(fu)提升(sheng)過濾(lv)效率。

       在(zai)選擇(ze)合(he)適的機型後，具體進行檢(jian)測(ce)大致(zhi)包(bao)含以(yi)下(xia)步(bu)驟：

1. 準備(bei)濾(lv)膜(mo)：選擇(ze)合(he)適的濾(lv)膜(mo)並(bing)滅菌(jun)，也可以(yi)直接(jie)選購已經伽(jia)馬(ma)射線（輻照）滅菌(jun)的無菌(jun)包(bao)裝過濾(lv)膜(mo)。濾(lv)膜(mo)材質通(tong)常推(tui)薦(jian)使(shi)用MCE混合纖維(wei)素材料。直徑根(gen)據過濾(lv)裝置的漏鬥(dou)大小來選擇(ze)，壹(yi)般(ban)為(wei)47或50mm較(jiao)為(wei)常見。空(kong)間(jian)根(gen)據需(xu)要檢測的(de)微(wei)生物(wu)來(lai)覺(jiao)得(de)，壹(yi)般(ban)為(wei)0.22或0.45微(wei)米(mi)。推(tui)薦(jian)使(shi)用帶(dai)網(wang)格(ge)線的(de)過濾(lv)膜(mo)，便(bian)於(yu)計數時的(de)觀察。

2. 過濾(lv)樣品：將(jiang)液(ye)體樣(yang)品通(tong)過濾(lv)膜(mo)過濾(lv)，微(wei)生物(wu)被截(jie)留。具(ju)體根(gen)據選擇(ze)的(de)過濾(lv)裝置型號(hao)參加說明書(shu)操(cao)作。

3. 轉(zhuan)移濾(lv)膜(mo)：將(jiang)濾(lv)膜(mo)移至適當的培養(yang)基(ji)上(shang)。

4. 培養(yang)：在(zai)適宜條(tiao)件下(xia)培養(yang)，使(shi)微(wei)生物(wu)生(sheng)長(chang)。

5. 計數：培養(yang)結束後，計數濾(lv)膜(mo)上(shang)的菌(jun)落數。